生物学杂志

2013, v.30;No.172(02) 5-9

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青海湖盐单胞菌QHL1 ectABC基因簇克隆鉴定及二氨基丁酸转氨酶基因ectB的异源表达
Characterization of the ectABC gene cluster and heterologous expression of the ectB gene from Halomonas sp. QHL1 in Qinghai Lake

刘建;朱德锐;李逸;李丹丹;李耀东;刘德立;

摘要(Abstract):

从青海湖20份水样筛选得到一株优势中度嗜盐菌QHL1,经初步鉴定为盐单胞菌属。设计保守基因ectB的引物,以基因组DNA为模板,PCR扩增获得ectB基因(1269 bp)。利用染色体步移技术,克隆获得四氢嘧啶合成基因簇ectABC及其上下游调控序列。DNAStar软件分析表明ectA、ectB和ectC位于同一个操纵子上,大小分别为579 bp、1269 bp和390 bp,预测分别编码192、422和129个氨基酸的肽链。同源性分析表明:Halomonas sp.QHL1ectABC基因簇所编码的二氨基丁酸转乙酰基酶(EctA)、二氨基丁酸转氨酶(EctB)和四氢嘧啶合成酶(EctC)与Halomonas sp.Nj223 ectABC基因簇所编码的酶蛋白相似性分别达57%、96%和85%。利用分子克隆技术构建二氨基丁酸转氨酶基因ectB的重组表达载体pET-28-ectB,通过限制性内切酶酶切和测序分析,结果表明其目的基因的插入位置、大小和读码框均正确。诱导表达重组菌,SDS-PAGE分析,目的蛋白条带约46 kDa。

关键词(KeyWords): 青海湖;四氢嘧啶;染色体步移;ectABC基因簇;克隆表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(No.31060013)

作者(Author): 刘建;朱德锐;李逸;李丹丹;李耀东;刘德立;

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