生物学杂志

2020, v.37;No.217(05) 15-18

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肝靶向肽修饰的人内皮抑制素rES-CSP融合蛋白可溶性表达及活性鉴定
Soluble expression and biological activity identification of CSP I-plus modified human endostatin rES-CSP

余田甜;张晶晶;许敏华;金小宝;汪洁;马艳;

摘要(Abstract):

为了方便获得大量的有活性rES-CSP融合蛋白,通过优化诱导表达条件,实现融合蛋白rES-CSP的可溶性表达,并纯化后检测其生物学活性,使该融合蛋白作为药用蛋白大规模生产成为可能。首先在常规条件下诱导表达融合蛋白rES-CSP,通过SDS-PAGE电泳分析,选出最优菌株;继而优化诱导温度和诱导时间,Western Blot检测目的蛋白可溶性表达情况,Ni-NTA亲和层析柱进行纯化后RP-HPLC分析其纯度; CCK-8细胞增殖实验和流式细胞仪检测融合蛋白生物学活性。结果选出目的蛋白约占菌体总蛋白43.84%的单克隆菌株为研究对象,在诱导温度为25℃,诱导时间为20 h时,融合蛋白rES-CSP实现可溶性表达,并且可溶性表达量较高。经纯化后获得的rES-CSP融合蛋白纯度达到98%以上;制备的rES-CSP融合蛋白具有抑制肝癌细胞HepG2增殖作用,且与HepG2结合能力较强;为融合蛋白rES-CSP的应用研究奠定基础。

关键词(KeyWords): 可溶性表达;肝靶向肽修饰的人内皮抑制rES-CSP;活性鉴定

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(No.81502520);; 广东省自然科学基金项目(No.2016A030310299);; 广东省科技计划项目(2017A09090544)

作者(Author): 余田甜;张晶晶;许敏华;金小宝;汪洁;马艳;

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参考文献(References):

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